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北京科鑒親子鑒定中心之基因座的選擇

    自1985年多基因座DNA檢驗(yàn)技術(shù)(MLP)開(kāi)始應(yīng)用于法庭科學(xué),英國(guó)就試圖用DNA技術(shù)建庫(kù),并且以此技術(shù)為基礎(chǔ)建立了DNA數(shù)據(jù)庫(kù)BIOTRAC系統(tǒng),但由于這項(xiàng)技術(shù)重復(fù)性差,技術(shù)路線復(fù)雜,無(wú)法滿足建庫(kù)的要求。相比之下,單基因座DNA分析技術(shù)(SLP,不同個(gè)體僅為12條帶,重復(fù)性相對(duì)較好,對(duì)其進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化規(guī)定后,接近建庫(kù)要求。90年代初英國(guó)FSS建立的DNA數(shù)據(jù)庫(kù)及美國(guó)FBI建立的DNA聯(lián)合索引系統(tǒng),采用的技術(shù)就是SLP遺傳標(biāo)記系統(tǒng),但SLP技術(shù)對(duì)建庫(kù)這一高標(biāo)準(zhǔn)的系統(tǒng)仍存在嚴(yán)重缺陷,如等位基因片段長(zhǎng)度呈連續(xù)分布,片段長(zhǎng)度、測(cè)量誤差等實(shí)際問(wèn)題無(wú)法解決,不同實(shí)驗(yàn)室者、不同實(shí)驗(yàn)室結(jié)果難以比對(duì),甚至同一檢材出現(xiàn)不同結(jié)果。該技術(shù)操作復(fù)雜,自動(dòng)化程度低,對(duì)檢材要求較高、靈敏度低,無(wú)法適應(yīng)建庫(kù)的需要。正因?yàn)槿绱耍缙诘?span lang="EN-US">DNA檢驗(yàn)分型結(jié)果不能以標(biāo)準(zhǔn)的、可重復(fù)的數(shù)碼形式記錄,難以進(jìn)行數(shù)據(jù)建檔。90年代中期建立的PCR-STR分型使建庫(kù)有了新的希望,STR基因座具有等位基因片段長(zhǎng)度短、通過(guò)聚丙烯酰胺凝膠可以精確測(cè)定等位基因片段長(zhǎng)度、等位基因頻率分布呈離散型,可對(duì)等位基因用標(biāo)準(zhǔn)統(tǒng)一的命名方法等優(yōu)點(diǎn),實(shí)現(xiàn)了結(jié)果比對(duì)的數(shù)字化,確保了檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性與重復(fù)性;同事STR檢驗(yàn)結(jié)果靈敏度極高,對(duì)微量、陳舊、腐敗檢材均可有效地?cái)U(kuò)增分型。在同一反應(yīng)體系中可以對(duì)多個(gè)STR基因座進(jìn)行復(fù)合擴(kuò)增,而后進(jìn)行同步分型,極大地降低了工作強(qiáng)度,節(jié)約了檢材,這些優(yōu)點(diǎn)對(duì)建立高質(zhì)量的DNA數(shù)據(jù)庫(kù)極其重要,使建立法醫(yī)DNA數(shù)據(jù)庫(kù)成為現(xiàn)實(shí)。

    英國(guó)FSS為世界上首先建庫(kù)的國(guó)家,1987年用多為點(diǎn)探針(MLP)指紋技術(shù)建庫(kù),1990年用單位點(diǎn)探針?lè)治黾夹g(shù)建庫(kù),形成了一定數(shù)量的數(shù)據(jù)庫(kù),并串并了100多宗案件,證明了不同地點(diǎn)案件之間的關(guān)聯(lián)性。但由于技術(shù)本身難以建立標(biāo)準(zhǔn)化、數(shù)字化的質(zhì)量控制體系,故一直未能進(jìn)行大規(guī)模建庫(kù)。自90年代初FSS就開(kāi)始尋找更有利于建庫(kù)的有效方法,吸收更有利于建庫(kù)的遺傳標(biāo)記,如cetus公司推出的DQa雜交系統(tǒng)。90年代中期,FSS研究推出了4個(gè)STR位點(diǎn)即:HUM vWF31/A、HUM THO1HUM F13A01HUM FES/FPS,TDP值可達(dá)1/10000。在此基礎(chǔ)是昂,于1995年研制了第二代熒光標(biāo)記復(fù)合擴(kuò)增系統(tǒng)(SGM,包括HUM THO1、D21S11、D18S51、D8S1179、HUM vWF31/A 、HUM FGA基因座及性別基因座,這一遺傳標(biāo)記系統(tǒng)的建立時(shí)真正開(kāi)始DNA建庫(kù)的基礎(chǔ),鑒別力可達(dá)5*10-8,結(jié)合研究的第三代復(fù)合擴(kuò)增系統(tǒng)(TGM,總體鑒別力可達(dá)10-15以上。

    美國(guó)的CODIS系統(tǒng)最初建庫(kù)選用的遺傳標(biāo)記系統(tǒng)也是單位點(diǎn)RFLP技術(shù),正式建庫(kù)選用的復(fù)合擴(kuò)增體系是有PE公司的Amp FLSTR Profilercofiler,profiler kit包括vWA,FGA,D8S1179,D21S11,D18S51,D5S818,D13S317,D3S1358,D7S820九個(gè)位點(diǎn),Cofiler Kit包括D3S1358,D7S820,D16S539,THO1,TPOX,CSF1P0六個(gè)位點(diǎn),并分別包括性別位點(diǎn)。Profiler Kit鑒別力可達(dá)10-16Cofiler Kit鑒別力大10-6.兩個(gè)Kit中有2個(gè)位點(diǎn)相同,起到內(nèi)對(duì)照作用,故codis系統(tǒng)選用的遺傳標(biāo)記系統(tǒng)含13個(gè)STR位點(diǎn)。目前幾乎所有建庫(kù)的國(guó)家及地區(qū)都以英國(guó)和美國(guó)建庫(kù)選用的遺傳標(biāo)記系統(tǒng)為首選方案。

    從英美等國(guó)家建立DNA數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)遺傳標(biāo)記的選擇經(jīng)驗(yàn)來(lái)看,必須選擇多態(tài)性高、分型穩(wěn)定、重復(fù)性好、結(jié)果可數(shù)字化、易于標(biāo)準(zhǔn)化及質(zhì)量控制的系統(tǒng)。在篩選STR基因座時(shí),應(yīng)遵循以下一些基本原則:(1DP值大于0.9(或觀察雜合度大于0.7),(2)等位基因片段在90-500bp范圍,(3)染色體定位明確,所選系統(tǒng)內(nèi)各位點(diǎn)不存在連鎖關(guān)系,(4)結(jié)果可靠,分型明確,重復(fù)性好,(5)復(fù)雜性STR位點(diǎn)如ACTB2,因重復(fù)單位有1-4bp多種形式,存在著長(zhǎng)度相同,而基因型可能不同的問(wèn)題,數(shù)據(jù)不呈離散性,一般不做建庫(kù)首選位點(diǎn)。(6)遺傳變異率低,其變異率應(yīng)小于0.2%。

聲明:該文觀點(diǎn)僅代表作者本人.
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