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科鑒基因親子鑒定之DNA的半保留復制

    DNA復制,是指以親代DNA分子為模板合成一個新的子代DNA分子的過程。Watso四和Crick在提出DNA的雙螺旋結構模型時就推論生物體內的DNA是以半保留復制方式進行復制的。后來,MeselsonStahl用同位素15N標記親代DNA的辦法,以試驗證實了WatsonCrick的推論。在DNA雙鏈中,兩條多核苷酸鏈的堿基互補,所以,在DNA復制過程中,兩條多核苷酸鏈間的氫鍵斷裂后,每條單鏈都可以作為模板,用于合成新的互補鏈。予代細胞出現(xiàn)的新的DNA雙鏈,其中一條是從親代完整地接受過來的,另一條是新合成的且與親代鏈按堿基配對原則互補。因此,兩個子代細胞的DNA雙鏈,都和親代細胞DNA序列完全一致。這種復制方式叫作半保留復制(semi - conservative replication)。遺傳信息按這種方式準確地從親代傳給子代。

    DNA的復制大致上分三個步驟:復制的起始,延長和終止。

     (一)DNA復制的起始

    復制的起始,是指參與復制的蛋白質識別復制起點,合成引物,在復制起點形成活性的引物模板復合物,并按堿基配對原則加上第一個核苷酸。

    DNA復制在DNA分子上特定的起始點開始,稱為復制起點。DNA復制從起始點開始雙向進行,每個復制起點的左右各有一個終點,一個起點和它的兩個終點組成一個復制單位,復制單位大小約7~ 30luln。真核生物在同一條DNA上有許多復制起點'由解鏈酶借助ATP的能量解開DNA雙鏈。每個復制單位的雙鏈被解開,形成一個“眼睛形”,在電鏡下可以看到復制單位的兩側各有一個成叉狀的復制又( replication fork),如同眼睛的兩個眼角。當兩個復制單位的眼角碰到一起,即兩個復制單位的復制終點。解開雙鏈除解鏈酶外,還有引物酶及其他復制因子,AIP提供能量,主要用于使維持堿基配對的氫鍵斷裂。

    引物酶按堿基配對的規(guī)律合成RNA引物,故又稱RNA聚合酶。引物的長度有十幾個到幾十個核苷酸不等,引物合成的方向是自5端至3端,因此已合成的引物必然保留一個3-OH末端。在DNA聚合酶的作用下,新鏈的第一個脫氧核苷酸就加到OH3′一末端上,形成磷酸二酯鍵。已聚合入引物鏈的脫氧核苷酸自然還保留自己的3OH末端,此時,復制叉的形狀初步具備。

    雙鏈解開后,還須保持開鏈狀態(tài),使新加入的核苷酸有模板作為依據(jù)。單鏈DNA結合蛋白結合于開放的單鏈上,起穩(wěn)定和保護單鏈模板的作用。

    (二)復制的延長

    1DNA聚合酶DNA聚合酶的作用是在引物上逐個加入dNIP,使新鏈不斷地延長,化學反應式如下:(dNMP)n+d1.1TP+(dNMP)。.+PPi。引物鏈寡核苷酸的3′端一OH基與三磷酸脫氧核苷心冊的僅磷酸基反應生成3′,5 ′—磷酸酯鍵,dNTP上的β和γ磷酸基游離而生成焦磷酸PPi。合成新鏈末端又出現(xiàn)新的3′端一OH,可使下一個核苷酸加入進去。

    DNA復制一共有5DNA聚合酶參與:α、β、γ、δ和ε。DNA聚合酶除聚合活性外,還有核酸外切酶活性。外切酶具有方向性,3′→5′外切酶活性能夠辨認并水解引物鏈3′端錯  配的核苷酸,同時利用DNA聚合酶活性補回正確配對的核苷酸,使復制繼續(xù)。DNA聚合酶  的這種功能叫做即時校讀(proofread),對于保持復制的準確性,減少堿基錯配起到重要作  用,據(jù)估計,DNA半保留復制中堿基錯配率大約為1×109。

    2.引物鏈延伸母鏈解開后兩股單鏈均作為模板,聚合酶指引單核苷酸加入新鏈。由于DNA雙鏈的走向相反,一鏈是5′端至3′端,其互補鏈為3′端至5′端,解鏈后,兩股單鏈在復制又上的方向也是相反走向。由于復制過程中引物延伸方向總是5′端向3′端,故領頭錠 (leading strands)可以順著解鏈方向延伸,但隨從鏈(lagging strands)復制方向與解鏈方向相反,不能順著解鏈方向連續(xù)延長,必須等待下一段暴露出足夠長度的單鏈時,隨從鏈才能開  始延伸,所以,這股鏈不可能連續(xù)地復制。用電鏡觀察DNA復制過程,發(fā)現(xiàn)復制中DNA  制又中有一股出現(xiàn)一些不連續(xù)的片段,至復制過程即將完成,這些片段才互相匯合。研究證  明,隨從鏈的復制是由引物酶分段生成RNA引物,在各段引物的基礎上分段延長。這種復制中的不連續(xù)片段叫做岡崎片段(Okazaki fragments)

    (三)復制的終止

    DNA連接酶在復制的最后階段起作用,把片段間留下的小缺口通過生成磷酸二酯鍵結合起來,成為真正的DNA子鏈。不僅隨從鏈的岡崎片段需要連接,領頭鏈同樣也有引物水解留下的空隙需要填補。此外,DNA復制的同時,幾乎與染色體蛋白,包括組蛋白類及非組蛋白類的合成同步進行。DNA復制完成后,隨即裝配成核蛋白并組成染色體。

聲明:該文觀點僅代表作者本人.
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