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DNA鑒定之甲醛固定和石蠟包埋組織及病理切片DNA檢測的樣品預(yù)處理

      用于組織包埋的固體石蠟為多種烴烷混合物,熔程為50~65℃,其化學(xué)性貫穩(wěn)定,在通常條件下不與酸性(除硝酸外)和堿性溶液發(fā)生作用。迄今尚無石嬙能直接導(dǎo)致包埋組織DNA降解的報(bào)道。但石蠟可阻礙消化液對組織的滲透,從而抑制蛋白酶K與組織內(nèi)蛋白質(zhì)的接觸,影響組織消化和DNA釋放。在DNA提取過程中,如未能有效去除石蠟,形成的DNA-石蠟混合液將不利于PCR擴(kuò)增?,F(xiàn)階段最為有效的脫蠟方法是用石蠟溶劑二甲苯進(jìn)行脫蠟,其次還有水浴脫蠟。操作步驟分別如下所述。

      1)二甲苯脫蠟:①將石蠟包埋組織切成5~10μm厚的薄片,置于1.5ml離心管中,加Iml二甲苯顛倒振搖40min以上;②用無水乙醇離心沉淀洗滌3次;③在40℃的加熱塊上烘干。
      2)水浴脫蠟:①將石蠟包埋組織切成5~10μm厚的薄片,置于1.5ml離心管中,加Iml STE緩沖液(10mmol/L Tris-HCI,100mmol/L NaCl,Immol/LEDTA);②72℃水浴10min;③插入吸水濾紙條,將浮蠟及STE吸干。再加入Iml STE,反復(fù)多次,至石蠟除凈,烘干。
 
聲明:該文觀點(diǎn)僅代表作者本人.
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