Chelex-100提取DNA的方法最早由Singer - Sam等1989年報道，Walsh等(1991)對該法在法醫(yī)物證檢材中的應用進行了系統(tǒng)的研究。目前Chelex - 100提取DNA的方法已成為一種常規(guī)技術(shù)，廣泛應用于生命科學各個領(lǐng)域。
一、原理：Chelex - 100是以成對的亞氨基二乙酸鹽離子為吸附因子的苯乙烯與二乙基苯的共聚物，它對高價金屬離子有很高的親和力和螯合作用。在低離子強度、堿性及煮沸的條件下，可以使細胞膜破裂，并使蛋白質(zhì)變性，DNA游離。檢材及其基質(zhì)中含有大量的核酸酶和金屬離子，Chelex - 100螯合吸附了金屬離子后，能夠抑制核酸酶對DNA的消化作用，防止DNA在煮沸過程中的降解作用，同時在高溫、低離子強度條件下，還有催化DNA釋放的作用。這樣的處理過程既達到了分離提取DNA分子的目的，同時除去了一些對擴增反應有抑制作用的因子（如重金屬離子）。
二、基本操作步驟及方法：Chelex - 100提取法廣泛應用于微量血液、組織塊、精斑、毛根、唾液斑、骨骼及牙齒等物證檢材的DNA提取，提取的DNA十分適合用作PCR模板，本節(jié)以微量血液為例，其他檢材右關(guān)內(nèi)容將在第4節(jié)敘述。
基本操作步驟：
（一）取血液l~5出，加入1.5ml離心管中，加入Iml純水，室溫下震蕩混勻15—30min。
（二）10000一12000r/min離心2~3min，棄上清。必要時用純水洗滌1—2次；
（三）室溫下12000r/min離心3min，棄去上清，留下沉淀。
（四）在離心管中加入200pl懸浮好的5010 Chelex - 100溶液，在56℃水浴中溫浴30min以上，震蕩溶液5~ 10s。
（五）100 aC溫浴8min，取出后高速震蕩溶液5～10s。
（六）室溫下12000r/min離心3min。上清即為用于PCR反應的DNA樣品。4。20C保存?zhèn)溆谩?/div>
注意事項：
（一）本法僅適用于PCR反應模板制備，提取后短時間之內(nèi)使用。
（二）操作中振蕩步驟需要充分。
（三）滅菌去離子水破碎紅細胞后，離心沉淀仍很紅，可再加Iml滅菌去離子水充分振蕩、離心，直至上清液無色。
（四）可適當延長56℃溫浴時間。
（五）基因組DNA是在上清液中，通常情況下在501ul擴增體系中加入1。51ul樣品足以滿足PCR反應的需要，具體加多少取決于起始檢材量。
（六）Chelex - 100使用終濃度一般為5%, pH值應在10。11之間，如果pH值有改變應試用，不應人為調(diào)整Chelex - 100的pH值。
（七）Chelex - 100放置后會沉淀，使用前必須混勻，用Chelex - 100提取的DNA模板如PC置時間長或從一個實驗室攜帶到另一個實驗室檢驗，擴增前應混勻后再離心，取上清液。PCR反應體系內(nèi)絕對不能含有Chelex - 100，否則Mg“會被螯合，使PCR擴增失敗。
（八）Chelex - 100法提取DNA煮沸很關(guān)鍵，溫度、時間要足夠。
聲明：該文觀點僅代表作者本人.
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