PCR的敏感性需經(jīng)常向?qū)嶒?yàn)室人員強(qiáng)調(diào),以確保沒有影響DNA分型結(jié)果的污染。由于該技術(shù)對(duì)低量DNA的敏感性,PCR反應(yīng)的污染總是被關(guān)注。檢驗(yàn)者如操作PCR反應(yīng)不慎,可能疏忽地加入自己的DNA。同樣警察或現(xiàn)場(chǎng)勘察人員如果操作不當(dāng)會(huì)污染收集到的作為證據(jù)的樣本。因此,每件物證的收集要用干凈的鑷子或勤換一次性手套。
為發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)室污染,要保留法醫(yī)DNA實(shí)驗(yàn)室成員的基因型分型,作為污染DNA分型的可能性記錄。這是經(jīng)常提到的工作人員排除數(shù)據(jù)庫(kù)。實(shí)驗(yàn)室人員在PCR擴(kuò)增之前處理樣本時(shí)要穿工作服( Ruyyt et aJ.,2003)。適當(dāng)?shù)恼诒挝?,如?shí)驗(yàn)用衣物、手套、面罩、發(fā)網(wǎng)用來預(yù)防皮膚細(xì)胞或毛發(fā)脫落到擴(kuò)增管中。這些細(xì)致的操作在處理微量或降解檢材時(shí)尤為重要。
一些實(shí)驗(yàn)室避免PCR污染的技巧如下:
(1)前PCR和后PCR的樣本操作過程在空間上要分開。通常使用一個(gè)獨(dú)立的房間或超凈工作櫥進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)。
(2) PCR用的移液器、試劑等物品要與實(shí)驗(yàn)室的其他器材分開放置,特別是與分析PCR產(chǎn)物的器材分開。
(3)要戴一次性手套并經(jīng)常更換。
(4)如果可能,反應(yīng)可在層流凈化罩中完成。
(5)在處理每一新樣本時(shí)要用防氣溶膠的吸頭并更換,防止交叉污染。
(6)試劑要小心處理防止出現(xiàn)DNA或核酸酶污染。
(7)當(dāng)PCR擴(kuò)增區(qū)不用時(shí),用紫外線照射,使用異丙醇和(或)lOc/o漂白溶液清潔工作區(qū)和儀器。確保在DNA提取時(shí)或PCR之前破壞無(wú)關(guān)的DNA( Kwok及Higuchi,1989;Prince及Andrus,1992)。
當(dāng)一個(gè)未被擴(kuò)增的樣本被擴(kuò)增DNA污染,會(huì)導(dǎo)致PCR產(chǎn)物的繼續(xù)擴(kuò)增。擴(kuò)增DNA比沒擴(kuò)增的DNA濃度要大很多,在PCR反應(yīng)中會(huì)優(yōu)先復(fù)制,而未擴(kuò)增的DNA會(huì)被掩蓋。疏忽地將很小體積的完全擴(kuò)增DNA混入未擴(kuò)增的DNA中,會(huì)導(dǎo)致擴(kuò)增和檢測(cè)的“污染”。因此,法醫(yī)實(shí)驗(yàn)室對(duì)作為證據(jù)的樣本要在嫌疑人樣本之前進(jìn)行檢測(cè),避免現(xiàn)場(chǎng)作為證據(jù)的樣本被嫌疑人的擴(kuò)增DNA污染。
移渡器的吸頭不要重復(fù)使用。在吸頭中的一小滴PCR產(chǎn)物含有10億個(gè)可擴(kuò)增的序列 拷貝。相比而言,1ng的人類基因組DNA僅含單拷貝DNA標(biāo)記約300個(gè)。
DNA鑒定之預(yù)防污染
2020-11-04 22:36:19 來源: 法醫(yī)物證學(xué)
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