微測(cè)序法(mini sequencing)的實(shí)質(zhì)是單核苷酸引物延伸(single nucleotide primer extension，SNuPE)或單堿基延伸(single base extension，SBE)，其過(guò)程首先是用PCR擴(kuò)增出含有靶SNP位點(diǎn)的一段DNA，然后在該產(chǎn)物中加入一條微測(cè)序引物在測(cè)序儀上進(jìn)行堿基延伸反應(yīng)，其中測(cè)序引物3 '端堿基緊鄰多態(tài)性堿基，在DNA聚合酶的作用下，引物只進(jìn)行一個(gè)堿基的延伸就終止反應(yīng)，即只加上一個(gè)熒光標(biāo)記的ddNTP就可經(jīng)毛細(xì)管電泳檢測(cè)出熒光信號(hào)類型而獲得延伸堿基的信息。與其他方法相比，該法靈敏、重復(fù)率高，所使用的設(shè)備在大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室都是常規(guī)裝備，因而該法容易普及。但是微測(cè)序法也存在一定的問(wèn)題，即當(dāng)一個(gè)反應(yīng)只檢測(cè)一個(gè)SNP時(shí)其造價(jià)較高，而當(dāng)一個(gè)反應(yīng)檢測(cè)多個(gè)SNP時(shí)又對(duì)復(fù)合PCR和延伸反應(yīng)過(guò)程中歷涉及的所有引物要求嚴(yán)格，引物結(jié)構(gòu)、濃度比例、退火溫度要求適當(dāng)，而且其測(cè)序引物的序列往往很長(zhǎng)，甚至可超過(guò)50mer。