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DNA鑒定之Y-STR基因座的研究現(xiàn)狀

      Cooke (1976)首先報(bào)道了存在于人類Y染色體上的串聯(lián)重復(fù)序列,為人類遺傳學(xué)和法醫(yī)學(xué)的研究開辟了一條新的途徑。Roewer等(1992)發(fā)現(xiàn)了Y染色體上的第一個(gè)微衛(wèi)星DNA,重復(fù)單位為(GATA)。.現(xiàn)命名為DYS19。由于Y染色體多態(tài)性較低,且受當(dāng)時(shí)的技術(shù)限制,Y染色體多態(tài)性方面的研究進(jìn)展緩慢。至20世紀(jì)90年代初期,只有5個(gè)Y-STR基因座被詳細(xì)地描述,且只有DYS19被部分法醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室列入常規(guī)檢驗(yàn)項(xiàng)目。近年來,隨著分子生物學(xué)技術(shù)的飛速發(fā)展,越來越多的Y-STR被開發(fā)和利用。Prinz等(1997)第一次建立了Y-STR復(fù)合擴(kuò)增體系,命名為Quadruplex I,分別用兩種熒光JOE和FAM標(biāo)記DYS19、DYS3891和DYS38911、DYS390,并做了法醫(yī)學(xué)應(yīng)用性研究。至2001年年底,研究者們?cè)赮染色體上發(fā)現(xiàn)了大約30個(gè)STR基因座。Redd等 (2002)新開發(fā)了14個(gè)基因座,加上早已發(fā)現(xiàn)的基因座,分4個(gè)體系復(fù)合擴(kuò)增27個(gè)基因座,并進(jìn)行了群體遺傳學(xué)的研究。Butler (2003)建立了一個(gè)能夠同步擴(kuò)增20個(gè)Y-STR基因座的五色熒光復(fù)合擴(kuò)增體系,得到了較好的擴(kuò)增結(jié)果。至2006年,經(jīng)文獻(xiàn)報(bào)道有法醫(yī)學(xué)應(yīng)用價(jià)值的Y-STR基因座已有220個(gè)左右(Gus-mao et a1.,2006)。其中,歐洲Y染色體分型學(xué)會(huì)建立的“最小的單倍型” ( DYS19、DYS385alb、DYS3891、DYS38911、DYS390、DYS391、DYS392、DYS393)加上YCAII而成的“擴(kuò)展的單倍型”最常用,這些基因座已經(jīng)進(jìn)入了歐洲中央DNA數(shù)據(jù)庫(kù)。美國(guó)DNA分析方法技術(shù)工作組(Technique Working Group On DNA Analysis Method,TWGDAM)推薦的 “美國(guó)單倍型”由“歐洲最小單倍型”加上DYS438和DYS439紐成。至2007年3月,Y-STR單倍型數(shù)據(jù)庫(kù)中已經(jīng)包含了世界各地388個(gè)人群的46 831種最小單倍型。
      Y-STR的商品化檢測(cè)試劑盒也得到迅速發(fā)展。2003年,Reliagene公司分別推出了Y_PlexrM6系統(tǒng)(6-FAM和TAMRA兩種熒光標(biāo)記,含有DYS19、DYS385alb、DYS38911、DYS390、DYS391、DYS393)和Y_PlexTM5系統(tǒng)(6-FAM、TAMRA和HEX三種熒光標(biāo)記,含有DYS3891、DYS38911、DYS392、DYS438、DYS439)。同年,Promega公司推出了Powerplex Y系統(tǒng)(JOE、TAMRA和FI。三種熒光標(biāo)記,含有DYS19、DYS385a/b、DYS3891、DYS38911、DYS39C、DYS391、DYS92、DYS393、DYS437、DYS438、DYS439),該系統(tǒng)對(duì)多至lOOng的女性DNA無擴(kuò)增產(chǎn)物,靈敏度達(dá)0.Ing。在女性DNA 1000倍于男性DNA的情況下能夠成功擴(kuò)增出男性分型。2004年,Reliagene公司又推出了Y_PlexTM12泵統(tǒng),在Y_PlexrM6系統(tǒng)和Y_Plexmo系統(tǒng)的基礎(chǔ)上引入Amelo-genin基因座作為PCR內(nèi)參照,最大限度地排除了假陰性,保證了結(jié)果的準(zhǔn)確性。同年,美國(guó)AB公司推出了AmpFISTR Y_FilerTM五色熒光復(fù)合擴(kuò)增系統(tǒng),在一個(gè)反應(yīng)管內(nèi)可同步擴(kuò)增17個(gè)基因座(VIC、FAM、NED和PET四種熒光標(biāo)記,含有DYS19、DYS385a/b、DYS3891、DYS38911、DYS390、DYS391、DYS392、 DYS393、 DYS437、 DYS438、 DYS439、 DYS448、 DYS456、DYS458、Y-GATA-H4、DYS635)。該系統(tǒng)具有很高的特異性和靈敏度,對(duì)多至200ng的女性DNA無擴(kuò)增,在女性DNA 2000倍于男性DNA的情況下仍然能夠成功擴(kuò)增出男性分型。在我國(guó),Y-STR復(fù)合擴(kuò)增系統(tǒng)的研究也取得了快速發(fā)展。趙東等(2003)利用聚丙烯酰胺凝膠電泳和銀染法復(fù)合擴(kuò)增了7個(gè)Y-STR (DYS393、DYS19、DYS390、DYS3891、DYS38911、DYS392、DYS385),并對(duì)中國(guó)漢族和日本群體的Y-STR單倍型遺傳多態(tài)性及群體差異進(jìn)行了詞查。劉秋玲等(2004)采用三組復(fù)合擴(kuò)增的方法建立了12個(gè)Y-STR復(fù)合擴(kuò)增體系( DYS391、DYS3891、DYS389rl、Y-GATA-A4、Y-GATA-Al0、Y-GATA-H4、Y-GATA-A-10、DYS390、DYS393、DYS434、DYS437、DYS439),以聚丙烯酰胺凝狡電泳和銀染法檢測(cè)并討論了其應(yīng)用價(jià)值。石美森等(2006)建立了一套四色熒光復(fù)合擴(kuò)增體系,設(shè)計(jì)了三套公共引物對(duì)分別嵌合在三組Y-STR的原始引物上,再利用6-FAM、HEX和TAMRA標(biāo)記的三組公共引物對(duì)同時(shí)復(fù)合擴(kuò)增7個(gè)Y-STR (DYS434、Y-GATA-A10、DYS531、DYS557、DYS448、DYS456、DYS444),得到了良好的分型結(jié)果。
 

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