一、 原理
當檢材較少時或者基因分型只需要少量的DNA時，可以用Chelex-100提取方法提取DNA。Chelex-100是一種化學整合樹脂，由苯乙烯、二乙烯苯共聚體組成。含有成對的亞氨基二乙酸鹽離子，整合多價金屬離子，尤其是選擇性整合二價離子，比普通離子交換劑具有更高的金屬離子選擇性和較強的結(jié)合力．能結(jié)合許多可能影響一步分析的其他外源物質(zhì)。通過離心除去Chelex-100顆粒，使這些與Chelex-100結(jié)合的物質(zhì)與DNA分離，防止結(jié)合到Chelex中的抑制劑或雜質(zhì)帶到PCR反應(yīng)中，影響下一步的DNA分析，并通過結(jié)合金屬離子，防止DNA降解。
二、實驗?zāi)康?br />
掌握各種法醫(yī)學生物檢材DNA提取方法。
三、儀器設(shè)備
干熱器、恒溫水浴箱、高速離心機、離心管
四、試劑
Chelex-100法提取生物檢材所需試劑的配制
1． 5％ Chelex-100 （w/v）
稱取5克Chelex-100，加100ml滅菌純水，放4℃保存。
2． 10％ SDS
稱取10克優(yōu)級純的SDS，加純水到100ml溶解，室溫保存。
3． 5mg/ml PK酶（蛋白酶K）
稱取5mg PK酶，溶于1ml滅菌純水中，－20℃保存。
4． 1M DTT (二硫蘇糖醇)
稱取154.3mg DTT加1ml滅菌純水溶解，－20℃保存。
五、 實驗方法---Chelex-100法
1. 全血
1) 取3～10μl全血加到0.5ml離心管中，加人500μl純水，劇烈振蕩，室溫下放置15分鐘。
2) 13,000rpm離心3分鐘，去上清，收集沉淀。（必要時可用蒸餾水反復(fù)洗沉淀物，直至無色或血色素很少）。
3) 沉淀中加入200μl 5％ Chelex-100溶液（5％ Chelex-100為懸濁液，使用前要充分振搖，使Chelex-100顆粒懸?。?，在振蕩器上反復(fù)振蕩，放入56℃保溫30分鐘以上。
4) 取出后振蕩，100℃保溫8分鐘，振蕩后，13,000rpm離心3分鐘，上清用于PCR擴增，或放4℃保存?zhèn)溆谩?br />
2． 血斑
1) 剪取約0.5cm2的血斑，加到0.5ml的離心管中，加入500μl純水，劇烈振蕩，室溫放置15分鐘。13,000離心3分鐘，去上清。（可用純水反復(fù)洗至無色，載體不需去除，始終留在離心管中。）
2) 以下步驟同全血的提取方法。
3． 混合斑
1) 取適量含有混合斑的檢測，剪碎后放入5ml小燒杯中，加入3ml純水、300μl 10% SDS及150μl 5mg/ml 的PK酶，用牙簽攪拌后，放入37℃水浴6小時以上（最好過夜）。
2) 將水浴好的檢材移入1.5ml離心管（檢材載體用一次性注射器擠壓后去除），13,000rpm 離心3分鐘，去上清，每管加1.4ml 純水，振蕩，13000rpm 離心3分鐘。洗三次后，移入0.5ml離心管中，13000rpm離心3分鐘，棄上清。
3) 向沉淀物的離心管中加入200μl 5％的Chelex-100（可根據(jù)檢材量的多少進行調(diào)節(jié)），4μl 5mg/ml 的PK酶及8μl 1M的DTT（PK酶及DTT的終濃度分別為100μg/ml和0.039M），振蕩后56℃保溫過夜。次日取出振蕩，100℃保溫8分鐘，振蕩，13000rpm離心3分鐘，上清用于PCR擴增或放4℃保存?zhèn)溆谩?br />
4． 含有唾液斑的檢材
1) 唾液斑：處理方法與血斑的處理方法相同。
2) 煙頭： 用鑷子夾住煙頭，剪刀剪下煙頭外圈的紙，剪碎后放入0.5ml離心管中，加人500μl純水，劇烈振蕩，13000rpm離心3分鐘，棄上清，加入100μl 5％ 的Chelex-100，放入56℃保溫30分鐘以上。取出振蕩，100℃保溫8分鐘，13000rpm離心3分鐘，上清用于PCR擴增或放4℃保存?zhèn)溆谩?br />
3) 口香糖：將口香糖剪碎后放入0.5ml離心管中，加人500μl純水，劇烈振蕩，13000rpm離心3分鐘，棄上清，加入100μl 5％ 的Chelex-100，放入56℃保溫30分鐘以上。取出振蕩，100℃保溫8分鐘，振蕩，13000rpm離心3分鐘，上清用于PCR擴增或放4℃保存?zhèn)溆谩?br />
5． 毛根
用鑷子夾住毛發(fā)的根部，剪去其余部分，將毛根放入0.5ml離心管中（處理毛發(fā)時很容易遺失，應(yīng)小心操作，最好在桌面上鋪一張白紙。），加人純水洗一次，然后加入30μl 5％的Chelex-100和2μl 5mg/ml 的PK酶，放入56℃保溫6小時以上。取出振蕩，100℃保溫8分鐘，振蕩，13000rpm離心3分鐘，上清用于PCR擴增或放4℃保存?zhèn)溆谩?br />
6． 肌肉與腦組織
取小米粒大小的肌肉或腦組織，放入0.5ml離心管中，加人純水洗一次，然后加入200μl 5％的Chelex-100和 5μl 5mg/ml 的PK酶，放入56℃保溫3小時以上。取出振蕩，100℃保溫8分鐘，振蕩，13000rpm離心3分鐘，上清用于PCR擴增或放4℃保存?zhèn)溆谩?/span>
