在親子鑒定報(bào)告里面會(huì)有對(duì)DNA鑒定的整個(gè)實(shí)驗(yàn)說(shuō)明和數(shù)據(jù)分析以及結(jié)論,其中有一項(xiàng)檢驗(yàn)結(jié)果是:實(shí)驗(yàn)中陰性及陽(yáng)性對(duì)照結(jié)果均正確。他是用來(lái)監(jiān)控實(shí)驗(yàn)過(guò)程,證明實(shí)驗(yàn)的正確與否的。那么陽(yáng)性和陰性對(duì)照是怎么樣運(yùn)用的呢?
Melton和Nelson(2001)提出在mtDNA分析中兩個(gè)主要的目標(biāo)是:1. 在檢驗(yàn)的任一階段防止污染,保持證據(jù)的終實(shí)性;2. 最大限度地收集存留于任何載體的mtDNA信息。質(zhì)控樣本和待測(cè)樣本同時(shí)進(jìn)行試驗(yàn)的每一個(gè)步驟,用上面提到的兩個(gè)目標(biāo)來(lái)監(jiān)測(cè)和評(píng)估試驗(yàn)是否成功。
利用空白試劑盒陰性對(duì)照來(lái)評(píng)估污染,空白試劑對(duì)照監(jiān)測(cè)從提取到最后序列分析的污染,而陰性對(duì)照監(jiān)測(cè)從擴(kuò)增到最后序列分析的污染。除不加DNA外,試劑或提取空白對(duì)照進(jìn)行待測(cè)樣本的所有步驟。在PCR擴(kuò)增步驟中介紹的陰性對(duì)照或擴(kuò)增空白對(duì)照和待測(cè)樣本使用同樣的試劑,只是用去離子水代替了DNA模板。如果空白試劑和(或)陰性對(duì)照出現(xiàn)特異擴(kuò)增,導(dǎo)致和待測(cè)樣本的序列相同,那么待測(cè)樣本的所有數(shù)據(jù)必須舍棄,必須從擴(kuò)增開(kāi)始重復(fù),再次進(jìn)行檢驗(yàn)分析。
盡管盡最大努力保持實(shí)驗(yàn)室環(huán)境清潔,但有時(shí)還會(huì)發(fā)現(xiàn)實(shí)際對(duì)照污染。由于mtDNA分析時(shí)一項(xiàng)非常靈敏的技術(shù),因此,低水平污染比較常見(jiàn)。例如,Mitotyping Technologies 報(bào)道過(guò)去兩年間的檢案中,在1218次PCR反應(yīng)中有29次(2.4%)實(shí)際對(duì)照出現(xiàn)擴(kuò)增。這種污染與工作人員或最近處理的樣本均無(wú)必然關(guān)系,而被認(rèn)為可能是某一次性槍頭或PCR管出現(xiàn)的偶發(fā)性污染。
如果在試劑對(duì)照或陰性對(duì)照中同時(shí)觀察到污染,未知樣品的結(jié)果并不一定必須舍棄。通過(guò)人工混合樣本的研究表明:為了獲得可靠的序列數(shù)據(jù),我們可以設(shè)定背景污染的閾值。例如:FBI實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)建立了10:1規(guī)則,即在PCR后的數(shù)據(jù)分析中試劑對(duì)照或陰性對(duì)照出現(xiàn)污染的比例必須低于被檢測(cè)樣本數(shù)的十分之一。由于在這些程序中要進(jìn)行PCR產(chǎn)物質(zhì)量分析,因此采用樣本/污染比是可行的。最近的研究表明:規(guī)則是穩(wěn)妥和可靠的。
陽(yáng)性對(duì)照是用已知mtDNA序列的樣本表明擴(kuò)增和測(cè)序反應(yīng)方行正常。陽(yáng)性對(duì)照通常是經(jīng)過(guò)擴(kuò)增、測(cè)序和數(shù)據(jù)分析的已知DNA樣本。FBI實(shí)驗(yàn)室采用HL60細(xì)胞株作為陽(yáng)性對(duì)照。